测定方法
常用的测定方法有取样法和连续法。
1、取样法
在酶反应开始后不同的时间,从反应系统中取出一定量的反应液,并用适当方法停止其反应,再根据产物和底物在化学性质上的差别进行分析,求得单位时间内酶促反应的变化量。
2、连续法
基于底物和产物在物理化学性质上的不同,在反应过程中对反应系统添加酶的变性剂以终止反应,常用的连续测定法是光吸收测定法,即根据产物和底物在某一波长或波段上有明显的特征吸收差别而建立起来的连续观测方法,几乎所有的氧化还原酶都可用此法测定。
此外如荧光法、旋光法、电化学法也是常用的连续测定方法。对不易直接测定的反应,可使用酶偶联分析法,即用过量、专一的“偶联工具酶”,使被测反应继续进行到某一可直接测定的阶段。近年来,酶活性的测定工作正向两个方向发展,超微量酶活的灵敏测定,实现测定过程的自动化控制。
扩展资料
酶活力的大小可以用在一定条件下,它所催化的某一化学反应的转化速率来表示,即酶催化的转化速率越快,酶的活力就越高;反之,速率越慢,酶的活力就越低。所以,测定酶的活力就是测定酶促转化速率。酶转化速率可以用单位时间内单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。
酶活力的测定既可以通过定量测定酶反应的产物或底物数量随反应时间的变化,也可以通过定量测定酶反应底物中某一性质的变化,如黏度变化来测定。通常是在酶的最适PH 值和离子强度以及指定的温度下测定酶活力。
参考资料来源:百度百科-酶活性测定法
参考资料来源:百度百科-酶活力
1. 取清洁的100mL量筒5个;水舀子一个。
2. 分别从1,2,3,4号曝气池出水末端以及回流污泥槽(当吸泥机位于中间位置)中取100mL的污泥混合液置于量筒中。
3. 取样完成后,将量筒放回现场化验室的指定地点,分别将5个量筒中的污泥混合液用玻璃棒搅拌均匀后静置。
4. 静置30分钟后记录沉淀污泥层与上清液交界处的刻度数值就是污泥沉降比。
5. 准备5个定量滤纸分别编号,在103-105℃的烘箱中烘干2小时,在干燥器内冷却半小时后称重。
6. 将5个量筒中的水样分别到入5个烘干后的滤纸中过滤。
7. 待完全过滤后将滤纸放入103-105℃的烘箱中烘干2小时,在干燥器内冷却半小时后称重。
8. 用滤纸和污泥的重量减去滤纸的重量再乘以104就等于该水样的污泥浓度,用污泥浓度除以污泥沉降比就等于该水样的沉降指数。
9. 在数据记录完成后,用洗洁精将量筒清洗干净,以保持现场化验室的清洁卫生
极谱法能测定微量镉的方法很多,但矿样成分复杂仍需预先分离富集。火焰原子吸收光谱法测定微量镉一般也需经分离富集,石墨炉原子吸收光谱法则可直接测定。电感耦合等离子体发射光谱法测定镉的精密度较好,但对于0.0xμg/g含量镉的直接测定,灵敏度仍不够。电感耦合等离子体质谱法的灵敏度可以满足要求,由于锆和锡的干扰,影响痕量镉测定的精密度,采用王水溶样,锆和锡不溶出,可以较好地实现镉的直接快速测定。
62.7.3.1 氢氧化铵-氯化铵底液极谱法
方法提要
试样经王水(或氢氟酸-高氯酸-王水混合酸)分解,在3mol/L氢氧化铵-1mol/L氯化铵底液中,镉有很好的波形,用示波极谱测量峰高,镉的峰电位约为-0.91V(对饱和甘汞电极)。在50mL溶液中,镉量在50~500μg时,峰高与浓度成正比。
铜在镉前起波,含量高时影响镉的测定,30倍以下不干扰。
本方法适用于稀有和有色金属等矿石和岩石中镉含量的测定。测定范围:w(Cd):(50~500)×10-6。
仪器
示波极谱仪。
试剂
氯化铵。
盐酸。
硝酸。
氢氟酸。
高氯酸。
王水新鲜配制。
氢氧化铵。
亚硫酸钠溶液(200g/L)。
铁(Ⅲ)溶液ρ(Fe3+)=50mg/mL2.5gFeCl3·6H2O溶于(1+99)HCl并稀释至100mL。
动物胶溶液(5g/L)。
氢氧化铵-氯化铵溶液20gNH4Cl加100mL氢氧化铵,用水稀释至120mL。
镉标准溶液ρ(Cd)=50.0μg/mL称取50.00mg高纯金属镉于250mL烧杯中,盖上表面皿,加入10mL(1+1)HNO3,微热溶解,移入1000mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
校准曲线
移取0mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL镉标准溶液置于一组50mL容量瓶中,加入3mL铁溶液,混匀,加入12mL氢氧化铵-氯化铵溶液、2.5mL亚硫酸钠溶液、1mL动物胶溶液,用水稀释至刻度,混匀。放置澄清后取清液置于电解池中,在电压-0.6V~-1.1V作极谱图,绘制校准曲线。
分析步骤
根据试样中镉含量的高低,称取0.5~1g(精确至0.0002g)试样置于250mL烧杯中,以水润湿,加入15mLHCl,盖上表面皿,于控温电热板上加热溶解,约20min后加入5mLHNO3,继续加热溶解,待试样溶解完全后,用少量水洗去表面皿,蒸发至湿盐。加10mL热水溶解盐类,冷却至室温,用水移入50mL容量瓶中,体积不超过25mL。
含硅高的试样将试样置于聚四氟乙烯烧杯中,加10mLHF,加盖,放置过夜。移去盖子,加入10mL王水、0.5mLHClO4,盖上表面皿,置控温电热板上微沸30min,用少量水洗去表面皿,继续加热至高氯酸白烟冒尽,取下冷却。加入5mLHCl,温热溶解盐类,取下冷却,用水移入50mL容量瓶中,控制体积不超过25mL。以下按校准曲线操作测得镉量。
镉含量的计算参见式(62.2)。
注意事项
1)如铜、铅含量都较高,大于镉的30倍,可在移入容量瓶前,在稀盐酸溶液中除铜,然后转氨性底液测定镉。
2)当试样中含有少量铜、镍和锌时,可以在一份试液中同时测定镉和这些元素。
62.7.3.2 二安替比林甲烷-酒石酸钠-碘化钾底液极谱法
方法提要
在20g/L碘化钾-0.0125g/L二安替比林甲烷-18g/L酒石酸钠-20g/L抗坏血酸-1g/L铁体系中,镉有灵敏的配位吸附波,峰电位-0.72V,镉离子浓度在0.001~0.3μg/mL之间与峰高呈线性关系。测定范围:w(Cd):(0.05~100)×10-6。
仪器
示波极谱仪。
试剂
盐酸。
硝酸。
抗坏血酸溶液(200g/L)。
氢氧化钠溶液c(NaOH)=3mol/L。
碘化钾溶液(200g/L)。
二安替比林甲烷溶液(2.5g/L)称取0.25g二安替比林甲烷置于烧杯中,加5mL(1+1)HCl,用水稀释至100mL。
酒石酸钠溶液(90g/L)称取18g酒石酸钠置于烧杯中,加150mL水及5mL(1+1)HCl,用水稀释至200mL,搅匀。此溶液约为pH3.5~4.0。
铁(Ⅲ)溶液(100g/L)。
镉标准溶液配制方法见62.7.3.1氢氧化铵-氯化铵底液极谱法。
甲基橙指示剂(1g/L)。
校准曲线
分取含镉0μg、0.01μg、0.05μg、0.10μg、…、5.00μg的镉标准溶液置于一组10mL比色管中,加入2滴铁溶液、1mL抗坏血酸溶液、0.5mL二安替比林甲烷溶液、1滴甲基橙指示剂,用氢氧化钠溶液调节至黄色,再用(1+5)HCl调节到刚出现红色,加入2mL酒石酸钠溶液,1mL碘化钾溶液,用水稀释至刻度,混匀。起始电位为-0.45V,用示波极谱导数部分进行测定。
分析步骤
称取0.05~0.2g(精确至0.0001g)试样,置于50mL烧杯中,加少量水润湿,加5~10mLHCl,盖上表面皿,加热溶解片刻,加入2~4mLHNO3,继续加热至试样分解完全。洗去表面皿,蒸干。再加1mLHCl蒸干。取下,加入2~3滴HCl、2mL水温热溶解盐类。冷后,加1mL抗坏血酸,以下按校准曲线进行测定。
镉含量的计算参见式(62.2)。
注意事项
1)干扰元素的允许量:铁(75mg),钙、镁(20mg),铝、钡(10mg),铬(3mg),铜、锌、钴、镍、锰、砷、锑、铋、钼、钒、汞、银、锡(1mg),钛(5mg),钨(0.5mg),铅(0.2mg),铈、铌、钽(0.05mg),铟、铂、钯(0.02mg),镓、碲、金(0.01mg),锗、铍(0.005mg)。另外NO-2、SO2-4、F-、Cl-和少量PO3-4均不干扰;
2)铅大于0.2mg严重干扰测定,需用硫酸钠和钡盐共沉淀避免干扰;
3)铟大于0.02mg干扰测定,加入0.02mol/LEDTA能消除0.1mg铟的干扰。
62.7.3.3 717阴离子交换树脂分离-溴化钾-碘化钾-六次甲基四胺底液极谱法
方法提要
试样经王水分解,在0.5mol/LHCl中,用717阴离子交换树脂富集镉,锌、铋被同时吸附,用(1+9)HNO3解吸,与Fe、Cu、Pb、Ni、Co、Sb5+、As5+、Se、Te、Mo、Sn等元素分离。
在0.66mol/L溴化钾-0.15mol/L碘化钾-六次甲基四胺底液(pH4)中,镉产生灵敏的吸附催化波,可用方波极谱测定。镉量在0.05~2.5μg之间峰高与浓度呈良好的线性关系。本方法适用于稀有和有色金属等矿石和岩石中镉含量的测定。测定范围:w(Cd):(0.1~10)×10-6。
仪器
极谱仪。
试剂
盐酸。
硝酸。
高氯酸。
氢氧化钠溶液(40g/L)。
抗坏血酸溶液(100g/L)。
溴化钾溶液c(KBr)=3.3mol/L。
碘化钾溶液c(KI)=1.5mol/L。
六次甲基四胺溶液(100g/L)。
镉标准储备溶液ρ(Cd)=100.0μg/mL称取0.1000g(精确至0.0001g)高纯金属镉于100mL烧杯中,加盖表面皿,沿杯壁加入20mL(1+1)HNO3溶解,蒸发至湿盐。用少许水吹洗表面皿,加25mL(1+1)HCl赶HNO3,蒸干后补加10mL(1+1)HCl,移入1000mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
镉标准溶液ρ(Cd)=0.40μg/mL用0.5mol/LHCl稀释镉标准储备溶液制得。
甲酚红钠盐-百里酚蓝钠盐混合指示剂0.05g甲酚红钠盐和0.05g百里酚蓝钠盐溶于100mL水中。
717阴离子树脂(60~80目)将树脂用40g/LNaOH溶液和(1+1)HNO3分别浸泡数小时,然后用蒸馏水洗至中性备用。
交换柱装置:用短颈漏斗做交换柱,内径应为0.5~0.6cm,漏斗颈下端塞一小团尼龙丝(或棉花),先往漏斗中注入蒸馏水,然后将处理好的树脂和水慢慢注入,装填树脂柱应高为5cm,然后在颈上端塞一小团尼龙丝,控制流速为1.5~2mL/min。漏斗上叠放滤纸,以过滤试样残渣,最后树脂用2mol/LHCl平衡备用。
校准曲线
吸取0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL镉标准溶液置于一组10mL比色管中,加5滴(1+4)HCl、6滴抗坏血酸溶液、2mLKBr溶液、1mLKI溶液、1滴甲酚红钠盐-百里酚蓝钠盐混合指示剂,滴加六次甲基四胺溶液中和溶液呈黄绿色(pH4),用水稀释至刻度,混匀,放置半小时以上。取上层清液,置于电解池中,于-0.35V起始扫描,进行方波极谱测定,绘制校准曲线。
分析步骤
称取0.2~1g(精确至0.0001g)试样置于200mL烧杯中,加入20mLHCl,加盖表面皿,加热溶解20~30min后,加5mLHNO3,待试样溶解完全后,用少量水吹洗表面皿,将溶液蒸发至干。用5mLHCl赶HNO32次,然后加入20mL2mol/LHCl,微热溶解盐类。将试液倾入已装好树脂的漏斗上,过滤残渣和交换富集同时进行。用0.5mol/LHCl洗烧杯数次及滤纸多次,洗净铁(Ⅲ)离子,弃去滤纸,再洗树脂数次。
向树脂上加5mL加热到60~80℃的(1+9)HNO3解脱镉,共加4~5次。解脱液收集在100mL烧杯中,加0.5mLHClO4,在控温电热板上加热蒸发至干。加5滴(1+1)HCl及数毫升水,再次蒸干。再加5滴(1+4)HCl溶解盐类。加6滴抗坏血酸溶液、2mLKBr溶液、1mLKI溶液、1滴甲酚红钠盐-百里酚蓝钠盐混合指示剂,滴加六次甲基四胺溶液中和试液呈黄绿色为止(pH4),小心注入10mL比色管中,用水冲洗并稀释至刻度,混匀。放置0.5h以上。以下按校准曲线进行方波极谱测定。
镉含量的计算参见式(62.2)。
62.7.3.4 717阴离子交换树脂分离-盐酸-碘化钾-四乙基溴化铵底液极谱法
方法提要
试样灼烧后,王水溶解,在0.5mol/LHCl中,经717阴离子交换树脂吸附镉,用硝酸解脱镉;除去硝酸后,镉在0.08mol/LHCl-0.05mol/LKI-0.05g/L四乙基溴化铵体系中,产生灵敏的吸附催化波,峰电位为-0.5V(对银电极)。检测下限为0.005μg/mL。测定范围:w(Cd):(0.05~12)×10-6。
仪器
示波极谱仪。
试剂
717阴离子树脂60~80目树脂,用40g/LNaOH溶液和(1+1)HNO3分别浸泡数小时,然后用蒸馏水洗至中性备用。
盐酸。
硝酸。
高氯酸。
四乙基溴化铵溶液(10g/L)。
碘化钾溶液c(KBr)=1mol/L。
抗坏血酸溶液(200g/L)。
树脂的处理同62.7.3.3717阴离子交换树脂分离-溴化钾-碘化钾-六次甲基四胺底液极谱法。
交换柱装置同62.7.3.3717阴离子交换树脂分离-溴化钾-碘化钾-六次甲基四胺底液极谱法。
镉标准溶液配制方法同62.7.3.3717阴离子交换树脂分离-溴化钾-碘化钾-六次甲基四胺底液极谱法。
校准曲线
分取含镉0μg、0.050μg、0.10μg、…、1.20μg的镉标准溶液置于一组25mL烧杯中,低温蒸干。取下冷却后,加入0.2mL(1+2)HCl、0.5mL四乙基溴化铵溶液、0.5mLKI溶液,用水移入10mL比色管中,混匀,再逐滴加入0.5mL抗坏血酸溶液(边加边摇动),用水稀释至刻度,混匀。起始电位为-0.2V时,用示波极谱导数部分进行测定。
分析步骤
称取1g(精确至0.0002g)试样置于瓷坩埚中,放入高温炉中,于600℃灼烧半小时。取出冷却,移入150mL烧杯中,加入20mLHCl,盖上表面皿,加热20min,再加5mLHNO3,待试样溶解后蒸干,冲洗并移去表面皿,以5mLHCl蒸干赶HNO32次,加入20mL2mol/LHCl微热溶解盐类。将此溶液经漏斗上过滤入交换柱,用0.5mol/LHCl洗烧杯及滤纸多次,直至滤纸无黄色为止。将滤纸弃去,再用0.5mol/LHCl洗树脂数次,弃去流出液,然后用已经加热到60~80℃的硝酸分4~5次(每次5mL左右)淋洗镉,用50mL烧杯承接溶液,加入0.5mLHClO4,蒸发至干,加入1~2mL(1+1)HCl,再蒸干,加入20mL2mol/LHCl微热溶解盐类。以下按校准曲线进行测定。
镉含量的计算参见式(62.2)。
62.7.3.5 原子吸收光谱法
方法提要
试样经王水(或氢氟酸+高氯酸+王水)分解;加氢氟酸溶样时,可加入硼酸配位氟。在(5+95)HCl中,于原子吸收光谱仪,使用空气-乙炔火焰,在波长228.8nm处测定。本方法适用于稀有和有色金属等一般矿石和岩石中镉含量的测定。测定范围:w(Cd):(5~1000)×10-6。
仪器
原子吸收光谱仪(带背景校正器)。
试剂
盐酸。
硝酸。
氢氟酸。
高氯酸。
王水新鲜配制。
硼酸溶液(60g/L)。
镉标准溶液ρ(Cd)=10.0μg/mL配制方法见62.7.3.1氢氧化铵-氯化铵底液极谱法。含1.00mg镉。
仪器
原子吸收光谱仪(带背景校正器)。
校准曲线
移取0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL镉标准溶液分别置于一组50mL容量瓶中,加入5mLHCl(若采用三酸分解试样,应补加5mL硼酸溶液),用水稀释至刻度,混匀。于原子吸收光谱仪上,使用空气-乙炔火焰,在波长228.8nm处测量吸光度。绘制校准曲线。
分析步骤
根据试样中镉含量的高低,称取0.1~1g(精确至0.0001g)试样,置于100mL烧杯中,加入20mLHNO3,盖上表面皿,于控温电热板上加热溶解,约20min后加入5mLHNO3,继续加热溶解,待试样溶解完全后,用少量水洗去表面皿,蒸发至干。加5mL(1+1)HCl,盖上表面皿,加热溶解盐类,取下,用少量水洗去表面皿,冷却至室温,用水移入50mL容量瓶中并稀释至刻度,混匀。
含硅高的试样将试样置于聚四氟乙烯烧杯中,加10mLHF(加盖放置过夜)。移去盖子,加入10mL王水、0.5mLHClO4,盖上盖,置控温电热板上微沸30min,用少量水洗去表面皿,继续加热至高氯酸白烟冒尽,取下冷却。加入5mL(1+1)HCl、5mL硼酸溶液,温热溶解盐类,取下冷至室温,用水移入50mL容量瓶中并稀释至刻度,混匀。以下按校准曲线进行测定。
镉含量的计算参见式(62.2)。
62.7.3.6 石墨炉原子吸收光谱法
方法提要
试样经盐酸、硝酸、氢氟酸、高氯酸分解后,加热至冒高氯酸白烟除尽氟后,制备成(1+99)HNO3溶液。加入磷酸二氢铵、硫脲、EDTA二钠盐混合溶液作为基体改进剂,石墨炉原子吸收光谱法直接测定镉的含量。
方法适用于水系沉积物及土壤中镉的测定,检出限(3s):0.05μg/g,测定范围:0.15~5.0μg/g。
仪器
原子吸收光谱仪,带石墨炉及自动进样装置。
试剂
盐酸。
硝酸。
高氯酸。
氢氟酸。
磷酸二氢铵、硫脲、EDTA混合溶液(100g/L磷酸二氢铵、100g/L硫脲、20g/LEDTA)称取10g磷酸二氢铵、10g硫脲及2gEDTA二钠盐,溶于100mL水中,用时配制。
镉标准储备溶液ρ(Cd)=1.00mg/mL称取1.0000g金属镉(99.95%),加入20mL(1+1)HNO3溶解,移入1000mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀备用。
镉标准溶液ρ(Cd)=50.0ng/mL用(1+99)HNO3逐级稀释镉标准储备溶液配制。
校准曲线
吸取0mL、0.50mL、2.50mL、5.00mL镉标准溶液于25mL比色管中,加2.5mL磷酸二氢铵-硫脲-EDTA混合溶液,用(1+99)HNO3稀释至刻度,摇匀。此系列的镉浓度分别为0ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL。按表62.24仪器工作条件(以日立180-80偏振塞曼原子吸收光谱仪为例)进行测定,绘制校准曲线。
表62.24 偏振塞曼原子吸收光谱仪石墨炉测定Cd工作条件(日立180-80)
续表
分析步骤
称取0.1~0.5g(精确至0.0001g)试样置于30mL聚四氟乙烯坩埚中,用水润湿,加入5mLHCl,于电热板上低温加热10min,再加2mLHNO3,继续加热20min,取下。加入2mL(1+1)HClO4及10mLHF,继续加热至冒尽白烟。取下冷却后加入1.0mL(1+3)HNO3,用水冲洗坩埚壁,加热溶解盐类后,移入25mL比色管中,用水稀释至刻度,摇匀。澄清后吸取5.0mL溶液于另一个25mL比色管中,以下按校准曲线步骤操作,测得试液中Cd的浓度。
按下式计算试样中Cd的含量:
岩石矿物分析第三分册有色、稀有、分散、稀土、贵金属矿石及铀钍矿石分析
式中:w(Cd)为试样中Cd的质量分数,μg/g;ρ为从校准曲线上查得试液中镉的浓度,ng/mL;ρ0为从校准曲线上查得空白试液中镉的浓度,ng/mL;V1为制备溶液的总体积,mL;V2为分取制备溶液的体积,mL;V3为测定溶液的体积,mL;m为称取试样的质量,g。
参考文献
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朱霞萍,汪模辉,李锡坤,等,2006.阴离子交换树脂分离富集水中痕量镉[J].离子交换与吸附,22(2):268
定有哪些方法
确定方法的方式有以下几种:1. 直接观察法 通过观察事物或现象的表面特征,从而得出相应的结论或方法。例如在科学实验、生产制造等场景中,通过观察设备或产品的运行情况,就可以直接获取相应的数据和信息来确定某种方法。这种方法的优点是直接可靠,缺点在于受到主观因素的干扰可能会影响到观察的准确度。2....
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成本导向定价法以营销产品的成本为主要依据制定价格的方法统称为成本导向定价法,这是最简单、应用相当广泛的一种定价方法。1、总成本定价法:成本加成,目标利润(一) 成本加成定价法(cost-plus pricing),即按产品单位成本加上一定比例的毛利定出销售价。其计算公式为:P=c×(1+r)P—商品的单价c—...
定价的基本方法有哪三类
定价的基本方法有成本导向定价法、市场导向定价法、顾客导向定价法三类。成本导向定价法:即以进货成本为依据,加上期望得到的利润来确定所卖产品的价格。成本导向定价法分为:成本加成定价法、目标收益定价法、盈亏平衡定价法。需求导向定价法:即按照想买单位产品的买家们的承受能力来确定价格。需求导向定价...
定价的方法主要有哪些?
定价方法:1、成本导向定价法:成本导向定价法是以产品单位成本为基本依据,再加上预期利润来确定价格的定价方法。①成本加成法 ②目标收益定价法 ③边际成本定价法 ④盈亏平衡定价法 2、市场导向定价法:企业通过研究竞争对手的生产条件、服务状况、价格水平等因素,依据自身的竞争实力,参考成本和供求状况...
电位滴定确定化学计量点的方法有哪些
电位滴定方法 1 直接滴定法 由指示电极和参比电极组成电池直接进行滴定,由指示电极的电位确定终点。直接滴定法终点的确定可分为三种类型:第一种是指示电极对试液中的被测离子敏感。例如用F—电极为指示电极,用La(NO3)3标准溶液滴定F-,由F-电极检出在等当点的电位突跃;第二种是指示电极对滴定剂...
什么是经济学定价法,公式是什么
经济学定价法包括成本导向定价法、盈亏平衡定价法、需求导向定价法。1、成本加成定价方法,即按商品单位成本加上一定比例的毛利,定出零售价。商品不同,加成比例也不同。2、盈亏平衡定价法(Breakeven Pricing),也叫保本定价法或收支平衡定价法,是指在销量既定的条件下,企业产品的价格必须达到一定的水平...
制定价格的两种方法是什么?
一般有三种制定价格的方式 1、成本加成定价法:最基本的定价方法,就是对产品成本进行一个标准的加成。价格=单位成本X(1+期望回报率),这是被企业比较广泛采用的定价方法,但是这种定价是不符合经济学逻辑的,因为价格是买方和卖方共同达成的,基于成本的定价只考虑了卖方的意愿,而忽视了买方的意愿。这种...