土壤总DNA提取的方法，详尽说明，最好列出注意事项，谢谢
SDS 高盐法(方案1)
具体步骤:
称取1 g 土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨;再倒入适量的液氮,研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末;
将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol/L磷酸盐[pH = 8.0 ] ,0.1 mol/L EDTA [pH 8.0 ] ,0.1 mol/L Tris-HCl [pH 8.0 ] ,1.5 mol/L NaCl ,1.0 % CTAB) 和50μl蛋白酶K(10 g/L ) 与5 g 土壤置于50 ml 的离心管中,放入37 ℃恒温摇床上,225 r·min - 1振荡30 min ;
加入1.5 ml20 % SDS ,轻轻混匀,65 ℃水浴加热2 h ,每隔15～30 min 轻轻摇匀1 次;5 000 r·min - 1离心10 min ,将上清液转入新的50 ml 离心管中;取4.5 ml 提取缓冲液加入原离心管,摇匀泥浆,加入0.5 ml 20 % SDS ,65 ℃水浴15 min ,用上述同样的离心速度离心10 min ,将上清液与原上清液合并;再重复此步骤1 次;
用与上清液等量的三氯甲烷于离心管中混匀,5000 r·min - 1离心20 min ;收集上清液,并加入0.6 倍体积的异丙醇,室温静置1 h ;25 ℃下12 000 r·min - 1离心20 min ,倒出上清液,干燥后加入500μl 去离子水,溶解粘附于离心管壁的DNA 及其杂质,并收集于1.5 ml 的微型离心管中.
更多方法生物帮上面有的， http://www.bio1000.com/zt/gene/jiyin.html 基因组学,基因的表达,基因工程药,物基因疗法,基因测序,基因检测,基因克隆,基因突变,基因治疗,基因破译,基因与性状,善恶基因,吝啬基因,懒惰基因,孤独基因 。
植物提取物提取
目前提取植物提取物用溶剂提取、超声波提取、微波提取酶提取超临界流体萃取、微波辅助提取等则作新提取技术广泛使用
溶剂提取
溶剂提取用溶剂固体原料提取效所用溶剂必须具备与所提取溶质互溶特性植物材料粉碎放入适合容器内加入数倍量溶剂采用浸渍、渗漉、煎煮、流连续提取进行提取巴科丹参提取物用溶剂提取提取精油类物质用溶剂提取
溶剂提取提取工艺程溶剂浓度、料液比、提取温度、提取间直接影响效提取率Cristina Juan等通溶剂萃取提取米赭曲霉素A用荧光探测液相色谱确定OTA含量研究表明适宜料液比、提取温度提取间情况提取物OTA含量高4.17ng/gMonte D. Holt等采用溶剂萃取熟麦种提取烷基间苯二酚实验表明采用溶剂萃取能够节约提取间
超声波提取
超声波提取利用超声波产强烈振空化效应加速植物细胞内物质释放、扩散并溶解进入溶剂同保持提取物质结构物性发变化超声波提取原理主要物理程近逐渐受重视较新提取数说超声波提取较规溶剂提取能幅缩短提取问消耗溶剂少浸率高具较高提取效率
超声波提取工艺程溶剂选择浓度、料液比、提取温度、提取间直接影响提取率Ling Zhou等利用超声波提取提取五味主要研究超声提取率影响素实验研究提取率随着温度升高升高随着功率增增Hong Van Le等利用超声波提取樱桃维素E酚类化合物主要比较超声提取酶提取提取间、提取率差异实验结表明超声波提取间比酶提取缩短6倍超声波提取提取率酶提取2～3倍钟等利用超声波萃取鲜竹叶叶绿素用光光度计定量测定所萃取叶绿素含量结表明：与用机溶剂提取相比超声波萃取仅萃取率高、速度快、效率高且室温提取需加热节约能源
超临界流体萃取
超临界流体提取(supercriticalfluid extractionSFE)种较新型提取离技术般采用CO2作提取剂超临界流体萃取原理利用超临界流体独特溶解能力物质超临界流体溶解度压力温度变化非敏特性通升温降压手段（或两者兼用）超临界流体所溶解物质离达离提纯目兼精馏提取两种作用具性易失、产品质量高、提取离程同步完等优点认绿色环保高新离技术特别适合于稳定产物理性物质离与精制
20世纪80代期超临界CO2提取技术逐步应用于植物性提取离研究应用较功项新技术Ruey Chi Hsu等CO2乙醇溶剂采用超临界流体提取技术提取灵芝效研究结表明：超临界流体提取保证灵芝提取物流性且受温度影响Monica Waldeb.ck等采用加压流体萃取技术提取橄榄角鲨烯α-育酚两种实验结表明：溶剂乙醇、提取温度190℃、提取间10min提取效YI QI ANG GE等采用超临界CO2提取技术麦胚芽提取维素E主要研究提取前处理提取工艺条件产率影响实验研究表明：粒30网、压力4000～5000psi、提取温度40～50℃、CO2流体流速2.0mL/min提取率高
微波辅助提取
微波辅助提取技术（microwave.assistedextractionMAE）利用微波能提高提取效率种新技术微波辅助提取利用微波加热特性物料目标进行选择性提取通调节微波参数效加热目标利于目标提取与离微波辅助提取提取植物原理植物品微波场吸收量能量周围溶剂则吸收较少细胞内部产热应力植物细胞内部产热应力破裂使细胞内部物质直接与相冷提取溶剂接触进加速目标产物由细胞内部转移提取溶剂强化提取程微波辅助提取技术原理与浸泡滤使用热能提取植物提取物速度却要比传统快减少提取间同避免价值植物提取物破坏降解
目前微波辅助提取其快速提取速度较提取物质量植物性提取力工具微波辅助提取选择性内加热且要求处理物料具良吸水性换言待离产物所处位置容易吸水否则细胞难吸收足够微波自身击破产物难迅速释放于液体提取体系要求溶剂物质具极性非极性溶剂微波作用敏Ti ng Zhou等采用微波辅助提取提取药用植物提取黄酮类香豆素类化合物通交实验研究品、料液比、提取温度间提取率影响实验研究表明：佳提取工艺条件提取率98.7%黎海彬等用微波辅助提取提取干罗汉罗汉皂苷结显示微波辅助提取提取率70.5%比规水提取高45%间缩短50%
微波超声波协同提取
微波种非电离电磁辐射辐射物质极性微波电磁场快速转向及定向排列产撕裂相互摩擦引起发热保证能量快速传递充利用具高效节能工业污染等优点微波穿透深度限（与其波同数量级）且强化提取程传质功能并显著超声波种高频机械波具湍效应微扰效应界面效应聚能效应等超声波所产热效应显著且局限空化泡周围极范围两者结合起协同作用利于破壁组释放等即通微波－超声波协同强化提取技术获取种高效价廉污染物性物质提取HeJT等采用微波－超声场协同药提取水溶性物性均取较效罗锋等采用微波超声波协同提取甘草提取黄酮马利华等研究传统蒸馏与微波超声波协同提取牛蒡类胡萝卜素提取率影响并通交实验确定佳提取条件白红进等别水乙醇蒸馏水及水乙醇－蒸馏水(体积比1∶1)等溶剂采用微波超声波协同提取芦荟并采用食用油氧化稳定性测定仪别测定提取物菜籽油猪油棉籽油及葵花油抗氧化作用
酶提取
植物细胞壁由纤维素构其植物效往往包裹细胞壁内酶提取利用纤维素酶胶酶蛋白酶等（主要纤维素酶）破坏植物细胞壁促使植物效限度溶解离种酶提取提取工艺酶选择、酶浓度、pH值、酶解温度、酶解间都影响植物提取物提取率
E. BARZANA等采用酶提取万寿菊提取类胡萝卜素主要研究料液比、酶浓度、酶解间温度等提取率影响研究结表明佳提取工艺：料液比1∶4、酶浓度0.3%、提取间1.5h、温度25℃张清等采用酶提取提取银杏性—黄酮并通交实验找酶浓度、pH值、酶解温度间等影响提取率佳工艺条件
SDS 高盐法(方案1)
具体步骤:
称取1 g 土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨;再倒入适量的液氮,研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末;
将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol/L磷酸盐[pH = 8.0 ] ,0.1 mol/L EDTA [pH 8.0 ] ,0.1 mol/L Tris-HCl [pH 8.0 ] ,1.5 mol/L NaCl ,1.0 % CTAB) 和50μl蛋白酶K(10 g/L ) 与5 g 土壤置于50 ml 的离心管中,放入37 ℃恒温摇床上,225 r•min - 1振荡30 min ;
加入1.5 ml20 % SDS ,轻轻混匀,65 ℃水浴加热2 h ,每隔15～30 min 轻轻摇匀1 次;5 000 r•min - 1离心10 min ,将上清液转入新的50 ml 离心管中;取4.5 ml 提取缓冲液加入原离心管,摇匀泥浆,加入0.5 ml 20 % SDS ,65 ℃水浴15 min ,用上述同样的离心速度离心10 min ,将上清液与原上清液合并;再重复此步骤1 次;
用与上清液等量的三氯甲烷于离心管中混匀,5000 r•min - 1离心20 min ;收集上清液,并加入0.6 倍体积的异丙醇,室温静置1 h ;25 ℃下12 000 r•min - 1离心20 min ,倒出上清液,干燥后加入500μl 去离子水,溶解粘附于离心管壁的DNA 及其杂质,并收集于1.5 ml 的微型离心管中.
变性剂加SDS 高盐法(方案2)
具体步骤：
取1 g 土样和等量的灭菌石英砂在研钵中混合,加入1 ml 变性剂(4 mol/L异硫青酸胍,10mmol/L Tris-HCl [pH 7.0 ] ,1 mmol/L EDTA[pH 8.0 ] ,0.5 % 2-巯基乙醇) ;液氮冰冻,研磨至溶解,重复3 次;
转入50 ml 离心管中,加入9 ml 提取缓冲液(0.1 mol/L磷酸钠[pH 7.0 ] , Tris-HCl [ pH 7.0 ] , 0.1 mol /L EDTA [ pH8.0 ] ,1.5 mol/L NaCl ,1 %CTAB ,2 %SDS) ;65 ℃水浴1 h ,每10 min 轻轻混匀1 次;5 000 r•min - 1 离心10 min ,取上清;
在原管中加入5 ml 提取缓冲液,混合后,65 ℃水浴10min ,离心,取上清,合入上述上清液;重复一次;加入等体积的氯仿混合,5 000 r•min - 1离心20 min ,取上清;加入0.6 倍体积的异丙醇,室温沉淀1 h ;20～25 ℃,12 000 r•min - 1离心20 min ,TE 溶解沉淀.
SDS-酚氯仿抽提法（方案3）
称取1g土壤样品，加入1ml 0.1mol/l PH8.0 磷酸缓冲液，玻璃珠振荡1min。溶菌酶5mg，使终浓度为2.5mg/ml,室温振荡15min,放置冰箱30min，加125ul 20%SDS振荡处理15min，离心，分装EP管，加酚（1：1体积），抽提1次，氯仿-异戊醇（1：1体积），抽提2次，加0.6体积异丙醇，室温放置1h,离心，70%乙醇清洗，200Ul TE 溶解。
冻融溶菌酶SDS裂解法（方案4）
取1g土壤样品，加如0.5ml灭菌的抽提缓冲液（100 mmol/L Tris-HCl , 100 mmol/L EDTA, 200 mmol/L NaCl, 1.0% PVP, 2.0%CTAB , PH8.0）, 加玻璃珠旋涡5~10 min，在液氮中冷却1 min后迅速在沸水中煮2 min，如此重复3次，13 000r/min离心10 min。上清夜快速置于冰上备用，沉淀用于进一步裂解。将上述沉淀悬浮于0.2ml提取缓冲液中，旋涡10min，加入溶菌酶（100ml/l）50ul,轻轻混匀后，37C温浴30min，再加入250ul SDS 缓冲液（100 mmol/l Tris-HCl, 200 mmol/l NaCl,2.0% SDS, PH8.0）,上下颠倒10min，13000 r/min离心10min,收集上清夜。
二、DNA纯化
葡聚糖-200凝胶G离心层析纯化
取2ml灭过菌的一次性塑料注射器，用注射器推杆将灭过菌的玻璃棉推到注射器筒底部，使其厚度约为0.5cm，然后向注射器筒中加入TE缓冲液浸透的葡聚糖凝胶G-200，制成简式离心层析柱，再置于10ml的离心管中，于高速冷冻离心机上以3000r/min离心20min，去除葡聚糖凝胶G-200中的TE缓冲液，将离心层析柱再置于另一10ml的离心管中，在离心层析柱顶部加入50ul粗土壤DNA，以10 min为周期于3000r/min离心，分别收集层析液。层析液浓缩至50ul
三、DNA的琼脂糖凝胶电泳
证明存在DNA。
四、DNA 的纯度和定量检测
用紫外分光光度计测量纯化后的DNA 溶液在波长为230 nm、260 nm、280 nm 下的OD 值，分别算出A260/A230及A260/A280值。来估计DNA的纯度。
五、 纯化后土壤DNA 的PCR扩增
PCR 反应体系为50μL ,模板为1μL 。PCR反应引物（放线菌通用引物）:
反应条件: 94 ℃ 3 min 预变性; 94 ℃ 1 min , 56 ℃1 min ,72 ℃1 min ,30 个循环;72 ℃补平5 min。PCR 产物用2 %的琼脂糖凝胶电泳检测。
六、检测扩增结果
凝胶电泳，用溴乙锭染色，在紫外光下检查结果。
土壤总DNA提取的方法,详尽说明,最好列出注意事项,谢谢
土壤总DNA的提取方法多种多样，其中SDS高盐法是一种常用的技术。具体步骤为：首先，称取1g土壤并置于研钵中，加入液氮研磨，重复三次；接着，将13.5ml提取缓冲液（包括磷酸盐、EDTA、Tris-HCl、NaCl、CTAB和蛋白酶K）与5g土壤置于50ml离心管中，在37℃恒温摇床上振荡30分钟；随后加入20%SDS，65℃水浴...
土壤总DNA提取的方法,详尽说明,最好列出注意事项,谢谢
将13.5 ml 提取缓冲液(0.1 mol\/L磷酸盐[pH = 8.0 ] ,0.1 mol\/L EDTA [pH 8.0 ] ,0.1 mol\/L Tris-HCl [pH 8.0 ] ,1.5 mol\/L NaCl ,1.0 % CTAB) 和50μl蛋白酶K(10 g\/L ) 与5 g 土壤置于50 ml 的离心管中,放入37 ℃恒温摇床上,225 r•min - 1振荡3...
土壤DNA直接和间接提取法的区别?
中提取DNA的方法可分为2大类，即间接提取法和直接提取法。间接提取法是首先去除土壤等 杂质 ，通过不同 离心速度 从土壤中分离到 菌体 细胞 ，再将回收到的细胞进行裂解，从而回收DNA。直接法 是不去除土壤等杂质，而是通过 物理 的、化学 的方法裂解土壤中的 微生物 细胞，使其释放DNA，再进行提取...
土壤微生物做高通量 土壤dna浓度应该是多少
第二种方法是高通量测序的方法，提取土壤总DNA，通过测定土壤中所有DNA的碱基序列，与细菌的碱基序列数据库比对，得到细菌的名称（操作分类单位，OTU），根据序列的条数大概估算这类微生物所占的比例。但这种方法无法区分死亡的细菌和活着的细菌，也有一定的局限性。
如何计算土壤微生物的菌数
用这种方法得到的值只是参考数值；第二种方法是高通量测序的方法，提取土壤总DNA，通过测定土壤中所有DNA的碱基序列，与细菌的碱基序列数据库比对，得到细菌的名称（操作分类单位，OTU），根据序列的条数大概估算这类微生物所占的比例。但这种方法无法区分死亡的细菌和活着的细菌，也有一定的局限性。
土壤中dna浓度多少合适
1-10纳克。土壤DNA，1-10纳克就足够了稀释10-50倍加1就可以了。是用土壤浸出液，照一样的流程真核细胞基因组DNA，可以从新鲜组织、土壤，培养细胞或低温保存的组织细胞中提取。
如何选择合适的全血DNA提取方法
首先，全血采集时应使用含抗凝剂的采血管，抗凝剂通常包括EDTA和肝素，EDTA更为理想，因为它不会干扰后续的反应。如果无法使用采血管，可自制0.04M EDTA溶液，每5ml血液加入0.4ml配制好的溶液，混匀后保存于-20℃至-80℃，以保证DNA质量。在选择DNA提取方法时，主要有两种类型：离心柱和溶液型。离心...
土壤提细菌总DNA量一般多少
土壤提细菌总DNA量一般多少 2ng左右，还高或过低pcr效果都不好，特别是模板量过高pcr是很难成功的，楼主可以测一下模板浓度，一般是25ul的反应体系中含有2ng左右的DNA效果比较好。
重组DNA分子导入受体细胞的主要方法有哪些
主要方法：【1】导入植物受体细胞：（1）农杆菌转化法。农杆菌是土壤中的一种微生物,在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力.农杆菌进入植物细胞后,其Ti质粒上的T-DNA会转移到受体细胞染色体的DNA上,是目的基因进入植物细胞。（2）花粉管通道法：在授粉后向子房注射含...
...DNA,看了几篇参考文献,其中一个就是Zhou的方法 ,取5g土壤,加13.5ml...
这个根据不同季节，不同要求有不同的调配方法，拿Tris—Hcl，一般有不同的pH值~~你可以去找一本生化实验书看一看！！一般文献里面会把配方说出来的~！