细菌的纯化中试管转接的目的是什么?
楼上要么在扯淡,要么就是老古董。
现在厌氧谁还用深层穿刺?都是厌氧管厌氧箱厌氧袋了。
穿刺接种以前是用来观察细菌是否有鞭毛的,当然,现在都有电子显微镜了,有没有鞭毛一目了然,这种上世纪中期发明的方法早就淘汰了。
话说中国人就是喜欢考这种过气的技术,也不奇怪。
菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法(一份酸奶,九份无菌水,再取一份第一只管中溶液,加九份无菌水,依次类推),将其稀释至1/10~10的-10次幂(我打不上去),然后从不同浓度稀 释液中分别取lmL倾注在平皿中,再倒入培养基相混合,待培养基凝固后倒置于30~C恒温下 培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯,直至纯化(茵落单个大小一致,革兰氏染色镜 检,茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株,分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移 到试管斜面上进行保存。 分离用培养基:牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1 000 mL,琼脂20g,pH7.0—7.2 ;保存用斜面培养基:酵母膏1% ,碳酸钙2% ,葡萄糖1% ,琼脂2% ,pH 7.0。 培养条件 将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上, 在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。 测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数;pH值用pHS一2C酸度计测定;乳酸定性 及含量测定依据食品检验技术 1I.2.1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑 选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优 良菌株一试管穿刺低温保存。 1.2 1.2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定:产乳 酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应⋯、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌 发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。 1.2.I.3 乳酸菌的保存⋯ 采用定期移植低温保藏法。培养基配方:葡萄糖1% 、蛋白胨0 2% 、 l(}l2PQ|0.2%、琼脂20%、pH值7 0,分装试管,121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺 培养,然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右),2个月移植1次。 1.2.2 分离乳酸菌的生理特点试验 1 2 2.1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照,定期取出接种培养基在721分光光度 计上,用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。 1.2.2.2 生长周期的测定oD值(方法同上);pH值:PHB一4pH计;可滴定酸(以乳酸计):吸取ImL菌液 加入9Ⅱ1L蒸馏水,加入1~2滴酚酞,用0.1NNaOH滴定。 1.2 2.3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。 供试样品及培养基 分离用样品:酸奶、酸奶及西红柿均为市售 分离用培养基:①BCP培养基:酵母膏2 5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,溴甲酚紫0 04g,琼脂15g, 蒸槽水lO00ml,pH7 0;②MRS培养基见文献 。 菌种保藏用培养基:脱脂乳培养基:新鲜牛乳离心去掉上层乳脂,下层奶液分装试管,105℃ 灭菌20mln。 菌利 鉴定用培养基见文献 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释,分别用倾注法、涂布 法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落,在 MRS平扳上有溶钙圈的菌落,反复纯化至纯种,挑菌至脱脂牛奶试管中保存 1.2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色,保留革兰氏阳性菌株.并对其所产乳酸能力进 行定性、定量分析,筛选出产酸高的菌株保存,再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】,进一步选择产 酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定 1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇:浓氨水:水=80:5:15,显色剂为0 04% 的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1% 的标准溶液,两种标准溶液 及乳酸发酵液 均点样3 .上行层析,显色与标准样比较 1.2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法,利用苄酯化法制备乳酸衍生物,将待测乳酸菌株在产 酸培养基内37"C培养3d,离心。取上清液剃备衍生物,气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为: EGS色谱柱,柱温160'C,气化温度180'17.,检测器温度l70"C,载气为N,。 1.2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛 出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定,并提取乳酸菌株DNA,采用熔链温度 .
细菌的纯化是指从混杂有其他种类微生物(不一定是杂菌)的群体中获得只含有某一种或某一株细菌的过程。一般不进行试管转接,而是只用试管进行混合菌种的稀释。
细菌纯化的一般步骤是:混合菌种(液体或固体培养的菌落)→试管稀释→平板涂布→培养→挑取单菌落→菌落培养→获得纯化菌株。
进行试管稀释时,是用接种环挑取固体培养的单菌落一环放入10ml无菌生理盐水中(或取1ml液体培养的菌悬液放入9ml无菌生理盐水中)混合均匀,取1ml菌悬液放入9ml无菌生理盐水中混合均匀,重复该步骤,直至稀释为大约0.1ml生理盐水中含单细胞在10-20个左右,取0.1ml于固体平板上进行涂布培养,形成菌落后挑取所需要的细菌进行培养,从而获得纯培养的单菌种。如果无法确定合适的稀释倍数,可用可能的稀释倍数两侧的稀释液各做几个涂布平板,经培养后选取菌落密度合适的菌落进行挑取。
在此过程中,试管稀释的目的只有一个,就是制成单位体积内包含合适单细胞细菌的菌悬液,以方便进行单细胞细菌分离,利于细菌的纯化。
细菌的纯化中试管转接的目的是什么?
在此过程中,试管稀释的目的只有一个,就是制成单位体积内包含合适单细胞细菌的菌悬液,以方便进行单细胞细菌分离,利于细菌的纯化。
菌体蛋白为什么要分级培养
试管转接到瓶或袋内培养基上的叫二级种。也叫原种。再通过二级种转接到袋内培养基上的叫三级种。也叫栽培种。转管的目的就是扩繁菌种。一般2-3次即可。扩繁次数太多。容易导致菌种退化。母种用来扩原种,原种用来扩栽培种,
试管培养基灭菌后,延长时间5天才转接母种会不会有细菌感染呢?
会。在试管培养基灭菌后延长时间5天才转接母种,会有细菌感染,灭菌的目的是消除培养基中的有害微生物,延长时间会增加试管培养基受到环境微生物污染的风险。
做大肠菌群实验时,小倒管里装的是什么?还是空的?
小倒管直接放到试管里去的,目的是要证明产气,E.coli是阴性的,产气肠杆菌是阳性的,实验结束小倒管里会有气体,这是实验过程产生的
如何纯化菌种
取被纯化物接种在无冷凝水、硬度较高(琼脂用量2.3%~2.5%)的斜面上,再降低培养温度至15~20℃,利用某些大型真菌在较低的温度下,菌丝生长速度比细菌蔓延速度快的特点,用尖细的接种针切割菌丝的前端,转接到新的试管斜面培养基中培养,连续2~3次就能获得所要的纯菌丝。也可打破试管,挑取内部长...
如何对污染的菌种进行纯化?
取被纯化物接种在无冷凝水、硬度较高(琼脂用量2.3%~2.5%)的斜面上,再降低培养温度至15~20℃,利用某些大型真菌在较低的温度下,菌丝生长速度比细菌蔓延速度快的特点,用尖细的接种针切割菌丝的前端,转接到新的试管斜面培养基中培养,连续2~3次就能获得所要的纯菌丝。也可打破试管,挑取内部长...
深层穿刺接种细菌到试管固体培养基中的目的是什么?
楼上要么在扯淡,要么就是老古董。现在厌氧谁还用深层穿刺?都是厌氧管厌氧箱厌氧袋了。穿刺接种以前是用来观察细菌是否有鞭毛的,当然,现在都有电子显微镜了,有没有鞭毛一目了然,这种上世纪中期发明的方法早就淘汰了。话说中国人就是喜欢考这种过气的技术,也不奇怪。
分离纯化菌种有何意义
目前,我国许多栽培黑木耳、银耳的单位和专业户,大都从各地区和科研与生产单位引进试管母种进行扩大培育。外地菌种对本地区的环境条件有一个适应的过程。通过栽培实践,再从本地区的自然条件出发,选择当家品种,自行分离培育,这是保证增产的措施之一。另一方面,菌种长期在试管斜面培养基上传代,也会产生...
大肠杆菌的分离和培养中三角瓶和试管分别什么作用
三角瓶用来将大肠杆菌,摇瓶培养(发酵);试管装入培养基后斜放是培养基固定成斜面,可以接种大肠杆菌菌种,用来留种。
如何纯化灵芝菌种?
品质优劣上有一些变异,因而需要再次纯化培养。菌种的纯化工作同样需在无菌条件下进行,当平面培养基上接种点处刚产生白色菌丝时,立即用接种针选择其中生长势旺盛部分,截取小块,尽量少带培养基,移入PDA斜面培养基试管中央,置25℃恒温了培养,经几次提纯转接,菌种无杂,生长正常,即为纯化的母种。